中國粉體網(wǎng)訊 用于制備載微球的方法很多，一般根據(jù)載體材料和藥物的性質(zhì)選擇最優(yōu)的方法，常規(guī)的微球制備方法有乳化-溶劑揮發(fā)法、相分離法、噴霧干燥法、 膜乳化法等。此外，還有許多新方法如鹽析法、高壓勻質(zhì)法，新技術(shù)如納米技術(shù)、微流控技術(shù)和超臨界流體技術(shù)等。
1、乳化-溶劑揮發(fā)法
微球制備最常用的方法是乳化-溶劑揮發(fā)法，其原理是將原輔料先分別溶于兩種互不相溶的溶劑中，再通過機械振蕩或超聲乳化的方法制成乳劑，被分散成乳滴的液體為內(nèi)分散相，分散乳滴的液體為外連續(xù)相，然后使內(nèi)分散相溶劑在一定條件下?lián)]發(fā)除去，成球材料析出，固化成微球。
此法具有包封率高、操作方法簡便、重現(xiàn)性好、無需特殊設(shè)備等優(yōu)點，但易受所包載藥物的理化性質(zhì)等因素的影響。根據(jù)乳劑類型不同通常又可將其分為單乳法（O/W、W/O）和復(fù)乳法（W/O/W、O/W/O）兩大類，單乳法常用來包載水不溶性藥物，而復(fù)乳法則用來包載水溶性且性質(zhì)不太穩(wěn)定的藥物。
有團(tuán)隊?wèi)?yīng)用乳化-溶劑揮發(fā)法制備了20(S)- 原人參二醇的PLGA載藥微球，經(jīng)掃描電鏡觀察所制得的微球不僅外觀圓整，平均粒徑約1.16 μm，且載藥量高達(dá)19.61 %，包封率為41.76 %，體外釋放實驗考察表明，其具有良好的緩釋效果。
2、相分離法
相分離法又稱凝聚法，是在藥物與聚合物載體的混合物（乳狀或混懸狀）中加入無機鹽或非溶劑物質(zhì)作為凝聚劑使聚合物的溶解度突然降低，從而可從混合溶液中析出來，并包裹在藥物表面形成一層保護(hù)層，再經(jīng)一定方法使保護(hù)層固化后即可得到高包封率的微球的方法。此法可通過改變攪拌速度和系統(tǒng)溫度控制微球的粒徑大小，但易受加入的凝聚劑和溶劑殘留等因素的影響。
有團(tuán)隊使用相分離法制備了噴他脒的PLGA微球，掃描電鏡圖像表明，該微粒呈多孔球形，藥物包封率為58%，相比用乳化-溶劑揮發(fā)法制備的微球包封率明顯增加。通過這種方法制備的曲普瑞林一個月緩釋微球制劑達(dá)菲林®也于1986年成功上市，該制劑使得給藥頻率從原來的每日1次減小至每月1 次，大大地提高了患者用藥的順應(yīng)性。
3、噴霧干燥法
近年，噴霧干燥技術(shù)越來越廣泛地應(yīng)用于制藥技術(shù)和生物化學(xué)領(lǐng)域，用這種技術(shù)制備的微球不但可被制成口服，注射等劑型，還有開發(fā)成靶向、緩控釋給藥系統(tǒng)的潛力。噴霧干燥法是指先將藥物與載體聚合物用有機溶劑溶解成溶液，然后將溶液用噴霧器噴至惰性氣流中形成無數(shù)的小液滴，再控制溫度使有機溶劑迅速蒸發(fā)，液滴迅速收縮成微球的方法。該法具有操作簡單，一步成球，且所制得的微球包封率高、粒徑均勻等特點，但不適用于制備易高溫變性的蛋白質(zhì)多肽類微球。
有團(tuán)隊采用噴霧干燥技術(shù)將鹽酸維拉帕米包被于殼聚糖中，得到的微球粒徑約21~53um，包封率高達(dá)91%，突釋量少，而且生物利用度研究表明，維拉帕米微球鼻腔給藥的生物利用度為58.6 %，明顯高于其溶液口服給藥的13 %。
4、膜乳化法
微孔膜乳化技術(shù)是近年發(fā)展起來的乳劑制備新技術(shù)，現(xiàn)已有實驗室通過膜乳化法研制出了可包載不同種類藥物的微球制劑。其原理是先將分散相在外加壓力作用下，通過微孔膜的膜孔形成乳滴，當(dāng)乳滴達(dá)到一定大小時從膜表面完全脫離，進(jìn)入到在膜表面連續(xù)流動的連續(xù)相中，此過程類似單乳乳化，然后通過事先加入連續(xù)相中的穩(wěn)定劑將乳滴吸附到一起，最終使乳滴固化形成微球。用膜乳化法制備的微球有粒徑均一且分布可控的特點，但常由于膜孔徑限制，難以制備出粒徑小于1um的微球。
有團(tuán)隊通過調(diào)整各項工藝參數(shù)，用SPG膜乳化法制備了平均粒徑約93μm的微球，實驗表明，其粒徑的正態(tài)分布系數(shù)為0.64，比傳統(tǒng)方法制備的微球粒徑分布集中。
（四）微球載藥量的影響因素
1、微球尺寸
藥劑學(xué)上對于微球（microspheres）的定義是指粒徑范圍在 1-500um 的微小球狀實體，粒徑小于500nm的通常稱為納米球或納米粒，納米級的微球更容易被細(xì)胞膜內(nèi)化，之前的研究也證明了微球的尺寸會影響細(xì)胞的攝取。以金納米顆粒為模型，研究發(fā)現(xiàn)在直徑為14-100 nm 的微球中，微粒直徑 50 nm 左右的區(qū)間內(nèi)細(xì)胞對其攝取量最優(yōu)，其他無論粒徑增大還是減小都會降低細(xì)胞攝取。因此，對于納米微球的尺寸來說，不同細(xì)胞對不同微球的攝取，很難找出一個最好的尺寸范圍， 但是不可否認(rèn)細(xì)胞對于尺寸不同的納米顆粒的攝取具有選擇性。
2、載體表面的剛度
近年來，研究人員發(fā)現(xiàn)微球載體表面剛度能夠改善傳統(tǒng)化療藥物的藥代動力學(xué)以及藥物內(nèi)化分布，增強微球藥物腫瘤靶向性并降低化療藥物對正常組織的 毒副作用。有團(tuán)隊的研究結(jié)果指出腫瘤細(xì)胞來源微顆粒的力學(xué)性能如表面剛度、變形能力同樣顯著影響微球藥物的藥效學(xué)與藥動學(xué)行為。納米微球在進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的過程中首先一個階段是藥物載體與細(xì)胞發(fā)生接觸，在這個過程中軟的納米藥物載體更容易規(guī)避巨噬細(xì)胞的攝取，避免被體內(nèi)免疫系統(tǒng)清除，有更高的機會到達(dá)腫瘤部位，并且軟的微球藥物載體具有更優(yōu)異的變形能力，可以穿過腫瘤細(xì)胞 間的間隙實現(xiàn)深部滲透。這也說明了對于基于表面剛度的微球藥物傳遞系統(tǒng)的 設(shè)計中，應(yīng)該仔細(xì)考慮它們的力學(xué)性能，以產(chǎn)生既具有更高的腫瘤靶向性，又對受體具有更高選擇性的微球藥物載體。
3、表面電荷
由于某些藥物表面帶有電荷，可以在納米材料表面帶有相斥電荷來更容易使其與材料接觸，從而提高細(xì)胞攝取量。如制備含有四氧化三鐵的超順磁性二氧化硅納米微球，并在表面結(jié)合羧基，再將抗癌藥阿霉素和順鉑通過氫鍵和配位鍵的作用負(fù)載在粒子上，兩種藥物載藥效率均超過60%，能有效地將阿霉素和順鉑導(dǎo)入MCF-7細(xì)胞，在正常血液條件下有緩釋特征，并在體外表現(xiàn)出較強的抗腫瘤活性。
（五）微球藥物的釋放問題
微球是一類極具開發(fā)潛力的新型藥物載體，但是目前仍存在很多問題，這些問題直接導(dǎo)致某些藥物難以推向市場，如微球藥物入體后由于微球形狀和體內(nèi)生物降解等造成的藥物非零級釋放；尚未實現(xiàn)和更有效地使藥物釋放發(fā)生在最合適的時間內(nèi)；對緩釋系統(tǒng)內(nèi)藥物的不同釋放程序和速度的研究不足以致達(dá)不到對某些疾病的綜合預(yù)防和治療；未實現(xiàn)智能化等，下面就其中的突釋、滯后和不完全釋放進(jìn)行詳細(xì)說明。
1、突釋
藥物從PLGA微球中的釋放會受到PLGA的吸水、水解、侵蝕以及藥物與水的擴(kuò)散等多種因素的共同影響，因此，微球中藥物的釋放通常會經(jīng)歷突釋、釋放滯后和快速釋放的過程。藥物的突釋除了受以上因素影響外，還與微球粒徑、聚合物相對分子質(zhì)量、孔隙率、藥物性質(zhì)、干燥方式等因素有關(guān)。突釋不僅會引起血藥濃度的波動，而且藥物過度釋放可能會導(dǎo)致血藥濃度超過治療窗，引發(fā)嚴(yán)重不良反應(yīng)。此外，大量藥物在初期釋放也會縮短藥物療效的整體持續(xù)時間。
2、滯后期
滯后是指藥物從制劑中緩慢釋放或完全不釋放的現(xiàn)象，通常在突釋或最初釋放后的一段時間出現(xiàn)。推測滯后出現(xiàn)的原因是聚合物鏈過度纏結(jié)，形成了玻璃態(tài)，因而呈現(xiàn)出高流動性和低吸水性的特點，導(dǎo)致聚合物微球中的擴(kuò)散孔道減少，藥物釋放困難。PLGA 的相對分子質(zhì)量越高、疏水性越強，則溶液滲透進(jìn)入聚合物的速率越慢，因此滯后期會更長，此時可通過增加微球中的孔道以縮短滯后期。
3、不完全釋放
如微球中的蛋白/多肽類藥物釋放不完全是普遍存在的現(xiàn)象，主要與蛋白/多類藥物的降解、構(gòu)象改變與聚集以及載體材料的吸附有關(guān)。
蛋白/多肽類藥物的穩(wěn)定性易受外界環(huán)境影響，制備過程中的剪切應(yīng)力、界面應(yīng)力、脫水應(yīng)力等都會導(dǎo)致其降解，影響活性。當(dāng)?shù)鞍?多肽類藥物暴露于油/水或水/空氣界面，或與交聯(lián)劑接觸時，其構(gòu)象都有可能發(fā)生變化，并自發(fā)聚集。據(jù)報道，分子間具有反向平行β-折疊片段的多肽和蛋白質(zhì)易在油/水界面聚集，進(jìn)而導(dǎo)致藥物療效降低、引發(fā)抗體反應(yīng)等后果。例如，用來治療貧血的促紅細(xì)胞生成素在微球化過程中易形成導(dǎo)致貧血的聚集體，治療藥物反而轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏∫蛩亍榱艘种凭奂⑶蛑苽溥^程中可使用穩(wěn)定劑或較親水的油相、采用水包油包固(S/O/W)乳化法等。
蛋白/多肽會通過非特異性吸附和離子相互作用與已降解或未降解的聚合物結(jié)合，從而導(dǎo)致藥物釋放不完全。多肽會與 PLGA 或其降解產(chǎn)物發(fā)生酰化副反應(yīng)，形成肽-PLGA 肽酰加合物。據(jù)報道，在PLGA中加入Ca2＋、Mn2＋等二價陽離子，可競爭性抑制多肽與 PLGA 的吸附反應(yīng)。
（中國粉體網(wǎng)編輯整理/青黎）
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